分析pcr儀擴增產物電泳分析時沒有條帶

   產生pcr儀擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺的原因有以下幾種：

1、反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系，這是常見的原因；

2、與反應起始時RNA的總量及純度有關：建議在試驗中加入對照RNA；

3、*鏈的反應產物在進行PCR擴增時，在總的反應體系中的含量不要超過1/10：建議用Oligo（dT）或隨機引物代替基因特異性引物（GSP）用于*鏈合成。

4、由于RNA模板存在二級結構，如環狀結果，有可能導致GSP無法與模板退火；或SSⅡ反轉錄酶無法從此引物進行有效延伸。

5、目的mRNA中含有強的轉錄中止位點，可以試用以下方法解決：

①將*鏈的反應溫度提高至50℃。

②使用隨機六聚體代替Oligo（dT）進行*鏈反應。