三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的問題解答

　　三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)如今很好的應(yīng)用在科研實(shí)驗(yàn)中，今天就來介紹細(xì)胞培養(yǎng)的一些常見問題解答：
　　1.冷凍管應(yīng)如何解凍？
　　取出冷凍管后須立即放入37℃水浴箱中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。
　　2.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
　　不能；每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法存活。
　　3.懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
　　一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)角瓶中，稀釋細(xì)胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度，重復(fù)前述步驟即可。
　　6.欲將一般動物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？
　　欲回收動物細(xì)胞，其離心速率一般為1,000rpm)，5-10分鐘，過高之轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。
　　7.細(xì)胞之接種密度為何？
　　依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無法生長之一重要原因。
　　8.冷凍保存細(xì)胞之方法？
　　方法一：冷凍管置于4℃30~60分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
　　方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3°C至–80℃以下，再放入液氮槽長期儲存。
　　-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
　　9.購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
　　研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：
　　培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于80℃太久。