BD流式細胞儀Z常見的幾種檢測方式

　　一、BD流式細胞儀測定用乙醇固定的DNA的含量
　　1、培養細胞的DNA含量的測定
　　制備單細胞懸液于200μl的PBS緩沖液中；加入2ml預冷的70%乙醇，4℃保存；
　　細胞固定的一般步驟為：
　　1)取單細胞懸液1～2×106個細胞于PBS（PH=7.2）緩沖液中；
　　2)300g離心5分鐘，棄上清，反復兩次；
　　3)重懸細胞于0.5ml PBS緩沖液中；
　　4)將細胞懸液放置于2～3ml冷70%乙醇中，混勻，保存于4℃，至少30分鐘。在4℃條件下可保存2~3周。
　　注意：
　　·根據實驗的要求，固定劑也可選用1～3%多聚甲醛；
　　·將乙醇作為固定劑時，乙醇應預冷至0～4℃；
　　·細胞在固定時，固定劑應緩慢滴入細胞懸液中，使固定劑的濃度緩慢增加，并不斷震搖，以免細胞成團。
　　·300g離心5分鐘，去上清，再重懸于400μl PBS中；
　　·顯微鏡下觀察，若有明顯的黏附，須再用篩網過濾；
　　·加入PI，避光孵育30分鐘；
　　·上BD流式細胞儀檢測。
　　2、新鮮組織的DNA含量的測定
　　1)用200mg濕重組織用機械法制成單細胞懸液；
　　2)500g離心5分鐘；
　　3)棄上清，重懸于10ml染色-去污劑中；
　　4)再過濾，用200目的篩網或70~80μm的篩網過濾；
　　5)上BD流式細胞儀檢測。
　　3、石蠟包埋組織切片的DNA含量的測定
　　1)從石蠟包埋切取切片50μm厚，2~3片，制成單細胞懸液；
　　2)用PBS緩沖液洗滌，500g離心5分鐘，棄上清；
　　3)加入PI液1ml室溫避光30分鐘；
　　4)調整細胞濃度為1×106/ml；
　　5)上BD流式細胞儀檢測。