實時熒光定量PCR技術（Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR）是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。
實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied biosystems公司推出，在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，使每一個循環變得“可見”，后通過Ct值和標準曲線對樣品中的DNA(orcDNA)的起始濃度進行定量的方法。
實時熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數敏感、準確的方法。如果用于RNA檢測，這被稱為逆轉錄實時PCR即（Real-time RT-PCR）是實時PCR法，它是指對DNA或經過反轉入（RT-PCR）的RNA通過聚合酶鏈式反應并實時監測DNA的放大過程，在擴增的指數增長期就測量擴增產物，因為擴增指數增長期測量值與特異DNA（RNA）起始量存在相關性，從而實現定量檢測。RealTime PCR的基本目標是測量和鑒別非常微量的特異性核酸，從而可通過監測CT值而實現對原始目標基因的含量定量。實時熒光定量PCR法大的優點是克服了終點PCR法進入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差，實現DNA/RNA的定量。該技術不僅實現了對DNA/RNA模板的定量，而且具有靈敏度和特異性高、能實現多重反應、自動化程度高、無污染、實時和準確等特點，該技術在醫學臨床檢驗及臨床醫學研究方面有著重要的意義。