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結合科譽興業BioSpaceX-3D的設備特性,可通過設備功能調控、實驗方案優化雙維度實現微重力下細胞團聚的高效分散,具體方法如下:
1. 利用設備專屬參數調節
借助儀器的45°傾斜旋轉功能,將轉速精準調控至5-20rpm區間,通過整機三維旋轉產生的溫和流體剪切力,打破初期細胞簇并維持單細胞/小聚集體懸浮狀態;同時可利用其精準重力模擬能力,微調重力場至適配區間(如10?2g-0.1g),減少重力沉降導致的細胞抱團,且該轉速與重力調節不會產生高剪切力損傷細胞。
2. 配套實驗流程優化
- 接種前預處理:用胰酶+0.02%EDTA混合液輕柔消化細胞團,制備單細胞懸液,若為難分散細胞可搭配低密度傳代預培養;同時利用儀器可放入CO?培養箱的特性,全程維持37℃、5%CO?的穩定環境,避免細胞應激性團聚。
- 培養基定制適配:在培養基中添加0.1%-0.5%甲基纖維素等抗團聚劑,結合設備耗材可定制的優勢,選用防粘附夾具/培養皿,降低細胞與容器、細胞間的粘連;若存在DNA介導的細胞聚集,可在培養基中加入低濃度DNA酶I(需控制用量避免細胞突變)。
- 實時監測與動態調整:通過設備WIFI互聯的實時重力監測功能,同步觀察培養體系內重力數值變化,若發現團聚趨勢可及時微調旋轉轉速或重力參數,同時定期更換1/3培養基清除代謝廢物,從環境層面抑制細胞聚集。
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