BD C6流式細胞儀測定細胞周期的步驟

 

1）將細胞以1×106接種于60mm培養板，80％匯合后轉染，或者按照計劃的方案處理。

 

2）24小時后在新鮮培養液中加入適當的抗生素（真核表達載體上的抗性標記）進行培養（該步可選）。

 

3）48－72小時后用胰酶消化（或者用細胞刮子）收集細胞，PBS（加入FBS使終濃度為1-3%）洗兩遍，棄上清，加入1ml70％預冷乙醇中，吹打均勻，-20℃或4℃固定12小時以上。

 

4）PBS（加入FBS使終濃度為1-3%）洗滌去乙醇，1000rpm,5min，洗兩遍。

 

5）0.5mlPBS重懸細胞，加入PI和RNaseA至終濃度50?g/ml，37℃（或室溫下）溫浴30min。

 

6）用BD C6流式細胞儀測定周期。

 

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

 

RNaseA：10mg/ml

 

應用：通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數，可檢測細胞的增殖、凋亡。