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定量PCR儀的分子生物學研究

更新時間:2016-08-08瀏覽:2430次
   定量PCR儀是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。實時熒光定量PCR技術是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。目前定量PCR儀已廣泛應用于分子生物學研究和醫學研究等領域。
  定量PCR儀的分子生物學研究:
  1)基因表達研究:細胞因子是一種調節蛋白,它對免疫反應、炎癥反應具有重要的調節作用,包括對淋巴細胞激活、增生、分化、存活和凋亡的調節。這些低分子蛋白由淋巴細胞、單核細胞和內皮細胞所分泌,其量的改變常常與一些疾病,如炎癥反應、自身免疫性疾病、移植排斥反應等有密切的關系。由于所得到組織樣本常常因為太小而不能滿足在蛋白質水平的檢測,另外,通常用的蛋白質檢測方法的靈敏度也難以完成對極微量的蛋白產物的檢測,所以應用PCR檢測細胞因子mRNA表達水平就顯得很有意義。實驗研究表明:定量結腸直腸癌淋巴結的癌抗原mRNA的表達量,可以作為診斷癌癥微轉移的重要依據。
  2)單核苷酸多態性及突變分析:實時熒光定量PCR儀一個誘人的應用前景是用于檢測基因突變和基因組的不穩定性。基因突變的檢測基于兩條探針,一條探針橫跨突變位點,另一條為錨定探針,與無突變位點的靶序列雜交,兩條探針用兩種不同的發光基團標記。如靶序列中無突變,探針雜交便會降低雜交體的穩定性,從而降低其熔解溫度。這樣便可對突變和多態性進行分析。拉米夫定是有效治療慢性乙型肝炎的抗病毒藥物,但臨床應用中不斷有病毒變異的報道,這些變異可能是治療失敗或病毒對治療無反應的原因。實時熒光定量PCR儀可以監測乙型肝炎患者服用拉米夫定后體內是否產生耐藥突變病毒。
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